Оценка криопротекторных свойств аргона
МЕЖДУНАРОДНЫЙ ЖУРНАЛ ПРИКЛАДНЫХ И ФУНДАМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ №4, 2012
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИЙ
«Инновационные медицинские технологии», Франция (Париж), 15-22 марта 2012 год.
Биологические науки
ФГБУН «Институт физиологии Коми НЦ УрО РАН», Киров; Сведенцов Е.П., Лаптев Д.С., Полежаева Т.В., Зайцева О.О., Худяков А.Н.
ФГБУН «Кировский НИИ гематологии и переливания крови ФМБА России», Киров; Шерстнёв Ф.С., Князев М.Г.
Адрес для связи с авторами: e-mail: ddic@yandex.ru
Известно, что многие газы, особенно инертные, в условиях низких температур и при повышенном давлении образуют клатратные соединения, в присутствии которых биологические объекты переходят в состояние анабиоза.
Проведены эксперименты по консервированию нативных лейкоцитов крови человека при -20 °С, -40 °С и -80 °С с инертным газом аргоном в криобароконтейнере при давлении в 1 атмосферу. Для замораживания биообъекта использовались разные программы: клетки в одногруппной плазме экспонировали в спиртовой ванне (С.В.) 10 (15, 17, 25) мин при -40 °С, затем сутки при -80 °С; 20 мин С.В. при -20 °С, затем сутки при -80 °С; 7 мин С.В. при -20 °С, далее 10 мин при -40 °С, затем сутки при -80 °С; сутки при -20 °С; сутки при -40 °С. Отогрев биообъекта проводили в водяной ванне (от +38 до +40 °С) в течение 1,1-2,0 минут.
При замораживании лейкоцитов до -40 и до -80 °С по любой программе жизнеспособность клеток (по эозину) составляет, соответственно, 34,3 ± 9,0 и 32,7 ± 7,1 % (от исходного уровня), при этом сохранность гранулоцитов не превышает 50 %. После отогрева клеток, хранившихся при -20 °С, их жизнеспособность снижается до ± 1,1 % с полным разрушением гранулоцитов. Слабый криопротекторный эффект аргона связан с его малой проницаемостью через клеточные мембраны ввиду большого размера молекул, а также низкой растворимостью в жидких средах при нагнетании его под давлением в 1 атмосферу.
Применение оптимальных условий замораживания лейкоцитов с аргоном (экспозиция 17 мин в спиртовой ванне криостата (-40 °С) и дальнейшего хранения в электроморозильнике (-80 °С) в сочетании с действием экзоцеллюлярного криофилактика «Модежель» позволяет повысить жизнеспособность клеток до 47,8 ± 9,4 %, а сохранность гранулоцитов до ± 13,1 %.
Таким образом, применение инертных газов для введения биологических объектов в состояние анабиоза (клатратный анабиоз) является весьма перспективным направлением криобиологии и требует дальнейшего изучения.
Зайцева О.О.; Князев М.Г.; Лаптев Д.С.; Полежаева Т.В.; Сведенцов Е.П.; Худяков А.Н.; Шерстнёв Ф.С.
|
|